Kolajen proteini ile H-ras aktif hücrelerinin etkileşimi

Abstract

Düşük molekül ağırlıklı GTP-bağlı protein süper ailesinin üyesi olan ras proteinler, normal selüler proliferasyonunu düzenleyen kritik sinyal yolaklarının aktifliğini kontrolde rol almışlardır. Aktif ras proteinlerinin genellikle insan tümörlerinin gelişimine katkıda bulunduğu gösterilmiştir. Kolajen proteinleri memelilerde çok miktarda bulunurlar ve dokuların biyokimyasal yapıları için önemlidirler. Ayrıca hücre adezyonu, taşınması, büyümesi, morfogenez ve yara iyileşmesinde önemli role sahiptirler. Bunun aksine insan kanser tiplerinin birçoğunda kolajen protein geninde mutasyon olduğu saptanmıştır. Yapılan bu çalışmada, 5RP7 H-ras aktif hücrelerinin kolajen tip IV proteinine bağlanma kapasitesi saptanarak kolajen tip IV e bağlı hücrelerin apoptotik indeksinin belirlenmesi amaçlanmıştır. Sıçan 5RP7 hücrelerinin büyüme eğrisinin çıkarılması için tripan mavisi ile boyama yöntemi, hücrelerin kolajene bağlanma oranlarının belirlenmesi için MTT ve kristal mor boyama yöntemleri, kolajene bağlı hücrelerin apoptotik indeksinin belirlenmesi için ise agoroz jel elektroforez yöntemi kullanılmıştır. 5RP7 hücrelerinin büyümesi zamana göre tripan mavisi ile belirlenmiştir. Bu sonuca göre, diğer çalışmalar için optimum hücre sayısı 12,5x104 ml/hücre olarak tespit edilmiştir. 5RP7 hücrelerinin kolajen tip IV ün değişik konsantrasyonlarına bağlanma kapasitesi MTT deneyi ve kristal mor yöntemi ile araştırılmıştır. Her iki metotun sonucuna göre, hücrelerin düşük kolajen tip IV dilüsyonunda (2.5 mg/ml) bile kontrol hücrelerine göre oldukça yüksek bağlandığı tespit edilmiştir. DNA fragmentasyonu deneyine göre kolajen tip IV'e bağlı 5RP7 hücreleri apoptoza gitmeyerek DNA merdiven görüntüsü göstermemiştir. Hücreler kolajen tip IV'e kuvvetlice bağlanmıştır.