Penisilin G Açilaz saflaştırılması için yeni destek materyali

Abstract

Penisilin G açilaz (EC 3.5.1.11), endüstriyel süreçlerde yarı sentetik penisilinlerin üretiminde kullanılmaktadır. Penisilin açilaz enziminin saflaştırılması, yarı sentetik penisilinlerin ve sefalosporinlerin üretimine imkân sağlar. Sunulan çalışmada, penisilin açilaz saflaştırılması için tekrar kullanılabilir makrogözenekli kriyojel biyoafinite kromatografi adsorbenti hazırlanmıştır. Kriyojeller makrogözeneklere sahiptir. Bu özellikler, kriyojellerin nano-mikro ölçek aralığında herhangi birdifüzyon sorunu olmaksızın kullanımına olanak sağlamaktadır. Çalışmada; ilk olarak, 4-aminoantipirin, metakroil klorür ile reaksiyona sokularak metakroil amidoantipirin (MAAP) monomeri sentezlenmiş ve elde edilen yapı FTIR ile karakterize edilmiştir. Daha sonra; MAAP ve 2- hidroksietilmetakrilat (HEMA) komonomerleri polimerleştirilerek poli(HEMAco- MAAP) kriyojel kolon sentezlenmiştir. Hazırlanan kriyojellerin spesifik yüzey alanı 25.8 m2g-1, şişme değeri % 1463.97 olarak bulunmuştur. Çalışmanın ikinci aşamasında ise MAAP içeren kriyojel kolonlara sulu çözeltilerden ve doğal kaynaklardan penisilin açilaz adsorpsiyonu incelenmiştir. Poli(HEMA-co-MAAP) kriyojellerin maksimum adsorpsiyon kapasitesi 190.2 mgg-1 (pH 5.0 ve 2 saat) olarak bulunmuştur. Doğal kaynaklardan penisilin açilaz saflaştırılması hızlı protein sıvı kromatografisi (FPLC) ile gerçekleştirilmiştir. Penicillium chrysogenum NRRL 1951, Penicillium crysogenum 807 ve Penicillium purpurogenum 455 ham ekstraktlarından penisilin açilaz saflaştırma faktörü sırası ile 17.89, 54.9 ve 10.0 olarak bulunmuştur. Kriyojellerden penisilin açilaz desorpsiyonu, 1 M NaOH kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Tekrarlanan 6 adsorpsiyon-desorpsiyon döngüsü sonucunda kriyojellerin adsorpsiyon kapasitesinde önemli bir azalma olmadığı belirlenmiştir. Sonuç olarak; poli(HEMA-co-MAAP) kriyojel, penisilin açilazın hızlı, ucuz ve spesifik saflaştırılması için uygun kullanım potansiyeline sahiptir.